Özet:

Origanum onites L. (kekik), tıp kozmetik ve farklı endüstri alanlarında kullanılan aromatik bir bitkidir. Uçucu yağ içerir ve dünyada aromatik bir bitki olarak yaygın kültüre edilir. Bu yüzden yiyeceklerde bir baharat olarak da tercih edilir. Terpen sentaz-6 (TPS-6), aromatik bitkilerde sesqui-terpenlerin sentezinden sorumlu bir enzimdir. O. onites’de bu enzimin gen dizi bilgisi ve ifade karakteristiğinin incelenmesi, tıp ve kozmetik vb. endüstrilerde ham madde olarak terpenlerin sentezinin arttırılmasına katkı sağlayabilir. Bu çalışmada, O. onites’de TPS-6 geninin kısmi olarak klonlanması ve dizilenmesi amaçlandı. O. onites’den toplam RNA izolasyonu TRI Reagent solüsyonu ile gerçekleştirildi. O. onites mRNA’ları Ters Transkripsiyon Yöntemi ile cDNA’lara dönüştürüldü. TPS-6 geninin orta bölgesi, TPS-6 genine özel dizayn edilmiş dejeneratif primerler kullanarak PCR yöntemiyle çoğaltıldı. 481 bç büyüklüğünde çoğaltılmış DNA parçaları elde edildi ve PGEM T Easy plazmit vektörüne T4 DNA ligaz enzimiyle eklendi. Rekombinant plazmit vektör XLI-Blue konakçı hücresine (E. coli) transfer edildi. Konakçı bakterilerden rekombinant plazmit vektör saflaştırıldı ve DNA dizi analizi gerçekleştirildi. Elde edilen DNA dizisi, NCBI gen bankası veri tabanında TPS-6 geni için doğrulandı ve EBI veri tabanındaki InterProScan ve Clustal Omega programları ile analiz edildi. Diğer bitki TPS-6 genler ile karşılaştırmak için filogenetik dendrogram çizildi. Elde edilen gen dizi bilgisi, ifade analizleri kullanılarak bu genin verimliliğinin arttırılmasında biyoteknolojik araştırmalara rehberlik edecektir. 

Anahtar Kelimeler: