Abstract:

GİRİŞ ve AMAÇ: BKV, çocukluk çağında genellikle asemptomatik olarak geçirilen ve özellikle böbreklerde olmak üzere perifik kan ve beyinde latent olarak kalabilen bir virustür. BVK’nın aktivasyonu immünsuprasyonu olan hastalarda hemorajik veya hemorajik olmayan sistit, ürostenoz ve nefropatiye neden olabilir. Özellikle transplant alıcılarında nefropati sıklığı %5’lere kadar ulaşabilmekte ve transplante edilen organın %30-60 erken kaybı ve kötü bir klinik seyirle sonuçlanabilmektedir. BKV viral yükünün serum ve idrar örneklerinde polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile kantitasyonu, erken tanı ve tedavinin yönetiminde önemli rol oynamaktadır. Real time PZR; klasik PZR’ye göre daha duyarlı, kantitasyon yapabilen, kontaminasyon riski az ve sonuçlanma süresinin kısa olması nedeniyle son yıllarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu çalışmamızda BKV tanısı için laboratuvarımızda tasarlanan kantitatif real time BKV PZR testinin analitik performansının değerlendirilmesi amaçlanmıştır. YÖNTEM ve GEREÇLER: BKV plazmidinden (ATCC 45025) standardlar hazırlanmıştır. 15 x 107 kopya/ml’den 3 x 101 kopya/ml’ye kadar seri dilüsyonlar içeren BKV plazmidinin spektrofotometrik ölçümü yapılmıştır. Amplifikasyon reaksiyonları için BKV VP1 gen bölgesine uygun, 5’ ucu 6-karboksifloreseinle (FAM), 3’ ucu 6-karboksitetrametilrodamin (TAMRA) ile işaretli primerler daha önce belirtildiği gibi kullanılmıştır. BULGULAR: Çalışmada testin analitik performansının değerlendirilmesi için analitik duyarlılık, özgüllük, doğrusallık, doğruluk ve kesinlik parametreleri belirlenmiştir. Testin analitik sensitivitesi 15 x 102 kopya/ml ve saptama limiti 5 x 102 kopya/ml olarak belirlenmiştir. 15 x 107 kopya/ml ile 15 x 101 kopya/ ml konsantrasyonlar arasında çalışılan dilüsyonların standard deviasyonu (SD) 0,02 ile 0,644 arasında, varyasyon katsayısı (CV) ise %0,79 ile %11,47 arasında değişmiştir. 19 dış kalite kontrol örneğinin sonuçları ilgili programla %100 uyumludur. Testimiz 15 x 102 kopya/ml ile 15 x 108 kopya/ml arasında lineer bir seyir göstermiştir. Özgüllüğü ise %100 olarak belirlenmiştir. Ayrıca dış kalite kontrol programı ile kalite kontrol örneklerinin sonuçları çok yakın uygunluktadır. TARTIŞMA ve SONUÇ: Elde edilen sonuçlarımız doğrultusunda laboratuvar tasarımlı real time PCR protokolümüz; duyarlı, özgül, kesin ve geniş dinamik aralıklı tekraralanabilirliği olan bir test olarak bulunmuştur.

Keywords: