Görüntüleme
6
İndirme
2
Trizol gibi asit guanidium fenol kimyasalları, birçok numuneden yüksek-kalite total RNA izolasyonu için olanak sağlar. İnek plasentomundan (total, maternal ve fetal) ekonomik ve tekrar edilebilir bir metotla, yüksekkalite RNA izolasyonu yapabilmek için, total RNA 1 ml guanidin tiyosiyanat içeren asit solüsyonu, sodyum asetat, fenol ve kloroform ile santrifüj edilmiştir. Total RNA isopropanol ile çöktürülmüş ve hiçbir saflaştırma kiti kullanılmamıştır. İzolasyonlar iki farklı protokole göre yapılmıştır. İsopropanol fazına kadar çalışma (a) oda ısısında (20-22°C) ve (b) buz üzerinde (0-4°C) yapılmıştır. RNA kalitesi spektrofotometrik olarak, optik dansite (OD) ölçümü ile yapılmıştır (OD260 nm/OD280 nm > 1.7). RNA bütünlüğü agaroz jel elektroforezi ile kontrol edilmiştir. Elektroforezis sonuçlarına göre (a) protokolüne göre 28s, 18s ve 5s rRNA bantlar gözlenirken, (b) protokolüne göre çoğu zaman degrade RNA bantları gözlenmiştir. Total RNA konsantrasyonu (b) protokolüne göre belirgin ölçüde yüksek bulunurken, (a) protokolüne göre saflığı ve bütünlüğü çok iyi kaliteli RNA elde edilmiştir. Elde edilen total RNA’dan cDNA dönüşümü yapılarak PCR yapılmıştır. RT-PCR ürünleri (a) protokolüne göre izole edilen RNA’dan başarıyla elde edilmiştir. (a) protokolü, inek plasentomunun total, maternal ve fetal dokularından, hiçbir saflaştırma kiti kullanmadan, yüksek-kalite RNA izolasyonu için ekonomik ve tekrar edilebilir bir metod olduğunu göstermektedir
Acid guanidium phenol chemicals such as Trizol allow high-quality total RNA isolation from many samples. In order to be able to make high-quality RNA isolation, with an economic and repeatable method from wooden plasentom (total, maternal and fetal), the total RNA is centralized with an acid solution containing 1 ml of guanidine tiyosyanate, sodium acetate, phenol and chlorform. Total RNA is disintegrated with isopropanol and no purification kit has been used. The isolation is done according to two different protocols. The isopropanol phase is performed at (a) room temperature (20-22°C) and (b) on ice (0-4°C). The RNA quality is made spectraphotometrically, with optical dancite (OD) measurement (OD260 nm/OD280 nm > 1.7). The integrity of the RNA is controlled by agarose gel electrophoresis. According to the electrophoresis results (a) according to the protocol 28s, 18s and 5s rRNA bands were observed, while (b) according to the protocol often degrade RNA bands were observed. The total RNA concentration (b) is significantly high according to the protocol, while (a) the purity and integrity according to the protocol has been achieved very good quality RNA. PCR is made by making the cDNA conversion from the total RNA obtained. RT-PCR products are successfully obtained from the RNA isolated according to the (a) protocol. (a) the protocol indicates that cow plasentom is an economic and repeatable method for high-quality RNA isolation from total, maternal and fetal tissues, without using any purification kit;
Alan : Sağlık Bilimleri
Dergi Türü : Uluslararası
Makale Detay 
Benzer Makaleler
PDF Görüntüle
Dergi Bilgisi
Eseri Dinleyin
Alıntı Yap
Bu Sayfayı Yazdırın
Paylaş
Mendeley
